Como a concentração de DNA é calculada usando espectrofotômetro?
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Vídeo: Espectrofotometria e a lei de Lambert–Beer 2024, Abril
Anonim

Concentração de DNA é Estimado por medindo a absorbância em 260nm, ajustando o A260 medição de turbidez ( medido por absorbância em 320nm), multiplicando por o fator de diluição, e usando a relação que um A260 de 1,0 = 50 µg / ml de dsDNA puro.

As pessoas também perguntam: como você encontra a concentração e a pureza do DNA?

Avaliar Pureza de DNA , meça a absorbância de 230 nm a 320 nm para detectar outros possíveis contaminantes. O mais comum cálculo de pureza é a razão da absorbância em 260nm dividida pela leitura em 280nm. Boa qualidade DNA terá um A260/UMA280 proporção de 1,7–2,0.

Da mesma forma, o que é uma boa concentração de DNA? UMA Boa qualidade DNA a amostra deve ter um A260/UMA280 razão de 1,7-2,0 e um A260/UMA230 razão maior que 1,5, mas como a sensibilidade de diferentes técnicas a esses contaminantes varia, esses valores devem ser considerados apenas como um guia para a pureza de sua amostra.

Em relação a isso, como o NanoDrop calcula a concentração de DNA?

Você multiplica o valor da absorbância em 260 nm por um fator fixo (é 50 para DNA ) e você obtém o Concentração de DNA . Voilá. (Ok, é tecnicamente o A260 de uma amostra de 10 mm de espessura que é multiplicado por 50; o NanoDrop expressa A260 como se a amostra tivesse 10 mm de espessura, como em uma cubeta padrão).

Por que tivemos que usar um espectrofotômetro para quantificar nosso DNA?

UMA espectrofotômetro é capaz de determinar as concentrações médias dos ácidos nucléicos DNA ou RNA presente em uma mistura, bem como sua pureza. Usando a lei Beer-Lambert disso é possível relacionar a quantidade de luz absorvida com a concentração da molécula absorvente.

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