Por que o espectrofotômetro deve ser definido em um comprimento de onda específico?
Por que o espectrofotômetro deve ser definido em um comprimento de onda específico?

Vídeo: Por que o espectrofotômetro deve ser definido em um comprimento de onda específico?

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Vídeo: VIDEOAULA: ESPECTROFOTOMETRIA E CURVA DE CALIBRAÇÃO (VEJAM A DESCRIÇÃO, POR FAVOR) 2024, Novembro
Anonim

Quando você ajusta o Comprimento de onda com um espectrofotômetro , tu estão mudar a posição do prisma ou rede de difração de modo que diferentes comprimentos de onda de luz estão direcionado para a fenda. Quanto menor for a largura da fenda, melhor será a capacidade do instrumento de resolver vários compostos.

Portanto, em que comprimento de onda o espectrofotômetro será definido?

Dependendo da faixa de comprimento de onda da fonte de luz, ela pode ser classificada em dois tipos diferentes: Espectrofotômetro UV-visível: usa luz na faixa ultravioleta (185 - 400 nm) e faixa visível (400 - 700 nm ) do espectro de radiação eletromagnética.

Da mesma forma, por que você precisa calibrar o espectrômetro toda vez que muda o comprimento de onda? Espectrofotômetro precisa ser calibrado contra uma solução em branco, então naquela depois de fazer as medições, pode-se usar a absorbância da solução em branco como referência zero. Uma medida da capacidade de uma substância de absorver luz de um determinado Comprimento de onda.

em que comprimento de onda as leituras devem ser feitas?

Leva leituras em intervalos de 5 nm, um pouco antes e depois disso Comprimento de onda . Por exemplo, se a absorbância máxima foi encontrada em 450 nm, então para obter uma mais precisa lendo de λmax, tome a absorbância leituras em 440, 445, 455 e 460 nm.

Por que você está medindo a absorbância da solução em 550 nm?

Proteínas reagem com íons de cobre em alcalino solução para formar um complexo de cor violeta que absorve luz em 550 nm . Portanto, por medindo a concentração do complexo, usando A550 ( Absorvância no 550 nm ), tu são também medindo a concentração de proteína.

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